Canvis en l’expressió gènica de la metiltransferasa SETD6 associats a la metilació del seu promotor

Abstract

En aquest treball hem realitzat un estudi comparatiu de les diferències d’expressió gènica a nivell d’ARN missatger i a nivell proteic de dues línies cel·lulars de Leucèmia Limfocítica Aguda de tipus B (B-ALL). Una de les línies, REH, presenta metilació al promotor de la metiltransferasa SETD6 i l’altra, RCH-ACV, no. D’altra banda, hem tractat aquestes dues línies cel·lulars amb un agent desmetilant, Azacitidina (AZA) per veure si es pot recuperar l’expressió gènica de REH a nivell de transcrit i proteic. Per poder duu a terme aquest estudi, hem analitzat l’expressió del transcrit de SETD6 amb la tècnica de qPCR on hem observat diferències significatives en l’expressió de transcrit de RCH-ACV, la qual ha sigut major en comparació a REH. En canvi, el tractament amb AZA no ha obtingut diferències significatives de recuperació d’expressivitat de REH. Quan a l’anàlisi d’expressió proteica de SETD6, l’hem realitzat amb la tècnica de Western Blot, on hem observat l’expressió proteica de RCH-ACV i l’absència d’expressió de REH. No obstant això, tampoc hem obtingut la recuperació d’expressió de REH amb el tractament d’AZA. Per tant, és possible que les condicions experimentals emprades en aquest estudi per poder observar una recuperació d’expressió significativa potser no són les òptimes. Punt important a analitzar en detall en futurs projectes. Però sí que hem observat de manera significativa que la hipermetilació del promotor del gen SETD6 té una afectació a nivell d’expressió de transcrit i proteic, donant a concloure que la metilació és un factor important determinant de l’expressió de SETD6.

In this dissertation, we performed a comparative study of the differences in gene expression regarding messenger RNA levels and protein levels of two B-type Acute Lymphocytic Leukemia (B-ALL) cell lines. One of the lines, REH, has methylation to the SETD6 methyltransferase promoter while the other, RCH-ACV, does not. On another hand, we treated these two cell lines with a demethylating agent, Azacitidine (AZA) in order to see if REH gene expression can be restored at the transcript and protein level. To be able to carry out this study, we analyzed SETD6 transcript expression with the qPCR technique where we observed significant differences in RCH-ACV transcript expression, which has been greater in comparison to REH. To the contrary, treatment with AZA did not result in significant differences in terms of REH expressiveness recovery. Regarding the SETD6 protein expression assay, we performed it with the Western Blot technique, where we observed RCH-ACV protein expression and the absence of REH expression. However, we also did not achieve recovery of REH expression with AZA treatment. Therefore, it is possible that the experimental conditions used in this study, in order to observe a significant recovery of expression, have not been optimal. Important point to analyze in detail in future projects. However, we have significantly observed that hypomethylation of the SETD6 gene promoter influences on transcriptional and protein expression, concluding that methylation is an important determinant of SETD6 expression.