Generació de models cel·lulars experimentals per a l'avaluació dels efectes biològics de la sobreexpressió i silenciament del gen UEVLD en Leucèmia Limfoblàstica de cèl·lules T (LLA-T)

Abstract

Títol: Generació de models cel·lulars experimentals per a l’avaluació dels efectes biològics de la sobreexpressió i silenciament del gen UEVLD en Leucèmia Limfoblàstica Aguda de cèl·lules T (LLA-T) Autora: Núria Jansat Vilalta Tutors: Dr. Gerardo Ferrer Aguilar i Laura Martínez Verbo (IJC), Dra. Eulàlia Puigdecanet Riubugent (UVic-UCC) Data: Juny de 2023 Paraules clau: UEVLD, LLA-T, sobreexpressió, silenciament gènic, shRNA, vector lentiviral Els limfòcits T citotòxics (CTLs) i les cèl·lules Natural Killers (NK) destrueixen les cèl·lules diana, com les cèl·lules canceroses, fent porus a la seva membrana plasmàtica a través dels quals segreguen enzims tòxics, perforina i granzims. Les cèl·lules canceroses poden eliminar activament aquests porus mitjançant l’acció del complex de classificació endosomal necessari per al transport (ESCRT), contrarestant així la mort mitjançada per cèl·lules T CD8+. L’objectiu principal d’aquest estudi és la construcció de vectors plasmídics per a la generació de models cel·lulars de sobreexpressió i silenciament gènic de UEVLD, un dels gen codificant per ESCRT. Aquests models permetran l’estudi dels efectes biològics causats per aquesta modificació gènica del complex ESCRT. En el projecte s’aconsegueix la construcció de vectors plasmídics funcionals per a la sobreexpressió i silenciament gènic. S’aprofundeix en la validació funcional, quant a apoptosi i cicle cel·lular, dels models amb aquesta segona modificació gènica. Permetent així, establir si el gen UELVD participa en la resistència de les cèl·lules canceroses de LLA-T enfront de la citotoxicitat i si aquest seria una possible diana terapèutica eficaç per al tractament de LLA-T.

Title: Generation of experimental cellular models for the evaluation of the biological effects of the overexpression and silencing of the gene UEVLD in T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia (T-ALL) Author: Núria Jansat Vilalta Supervisors: Dr. Gerardo Ferrer Aguilar i Laura Martínez Verbo (IJC), Dra. Eulàlia Puigdecanet Riubugent (UVic-UCC) Date: June 2023 Keywords: UEVLD, T-ALL, overexpression, gene knock-down, shRNA, lentiviral vector Cytotoxic T lymphocytes (CTLs) and Natural Killer (NK) cells destroy target cells, such as cancer cells, by making pores in their plasma membrane through which they secrete toxic enzymes, perforin and granzymes. Cancer cells can actively eliminate these pores through the action of the endosomal sorting complex required for transport (ESCRT), thereby counteracting CD8+ T cell-mediated death. The main objective of this study is the construction of plasmid vectors for the generation of cellular models of overexpression and gene silencing of UEVLD, one of the genes encoding ESCRT. These models will allow the study of the biological effects caused by this genetic modification of the ESCRT complex. The project achieves the construction of functional plasmid vectors for gene overexpression and silencing. The functional validation, in terms of apoptosis and cell cycle, of the models with this second gene modification is explored. Allowing us to establish whether the UELVD gene participates in the resistance of T-ALL cancer cells to cytotoxicity and whether this would be a possible effective therapeutic target for the treatment of T-ALL.